优化舌尖采样方案以增强PRRS病毒分离

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本研究旨在评估不同的样品采集方案和细胞系，以便从围产期死亡仔猪（包括死胎和出生后24小时内死亡的新生仔猪）的舌尖液（TF）中成功分离出猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）。

研究方法：

在4天内，从5,000头PRRSV阳性繁殖群中的597头围产期死亡猪只中采集样本。将舌头组织分成20组（每组约30头死亡仔猪或舌组织）。每块舌组织被切成四份，每份随机采用以下四种采集方法之一：

1) 使用磷酸盐缓冲液 (PBS) 从新鲜组织中提取TF；

2) 使用病毒运送培养基 (VTM) 从新鲜组织中提取 TF；

3) 经过一次冻融循环后在PBS中提取 TF（冻融）；

4) 使用舌头组织匀浆（匀浆）

这样总共得到了80个样本（20组 x 4种方案），全部送往NAHLN批准的兽医诊断实验室进行RT-qPCR测试。我们计算了每组四种方法的RT-qPCR循环阈值（Ct）值的平均值，并选择平均Ct值最低的10个批次进行病毒分离 （VI）。测试了两种细胞系 (ZMAC和MARC-145) 和一批原代肺泡巨噬细胞（PAM）对PRRSV成功分离的影响。

研究结果：

所有样本经RT-qPCR检测均为PRRSV阳性；PBS、VTM、冻融和匀浆组的平均Ct值分别为21.9、21.8、22.6和24.8。

我们成功地从所有组的舌组织中分离出了PRRSV，但成功率各不相同。使用PBS的组别病毒分离成功率为22.6%，VTM组为12.1%，而冻融和匀浆组都只有2.8%。在MARC-145细胞中成功分离病毒的概率为3.1%，在ZMAC细胞中为21.0%，在PAM细胞中为4.8%。只有死胎的组别有35.5%的成功分离PRRSV的概率，而同时包含死胎和死亡新生仔猪的批次只有1.0%。

行业启示：

我们可以从死亡后仔猪的舌液中分离出PRRSV。从死胎中提取TF，使用PBS或VTM可以提高成功分离病毒的几率。在本研究中，ZMAC细胞系的表现优于MARC-145细胞系和PAM细胞。确保从样本采集到到达实验室的冷链可保持样本的诊断质量。从TF等聚集样本中分离PRRSV可提供多种监测和疫苗开发益处。使用聚集样本进行病毒分离可有效同时检测猪群中的多种PRRSV菌株（如果存在），这对监测和开发自源疫苗具有很大的优势。

来源：https://www.swinehealth.org/results/