仔猪舌尖液蓝耳监测新选择舌尖液有什么优势和劣势

对PRRS病毒进行监测，已经成为种猪群健康监测及制定相应决策的关键要素。在美国养猪业的实践中，最常用的监测策略是对即将断奶的仔猪进行采血并配合使用仔猪处理液（PF）。然而，这些采样方式有一定的局限性。

采血需要专门训练，而且由于需要对猪只进行适当的保定，所以很费时间。特定水平的流行率需要相应数量的样本。你想检测的疾病，其流行率越低，需要的血样就越多。如果所检测的疾病的流行率为10%，那标准的采样数量为30个。当流行率低于该阈值（10%）时，要想检测出至少1个阳性，那么就要大幅增加样本数量。

以目前诊断技术的敏感性（如PCR）来说使用混合样本，如处理液，有助于那些低流行率情况下的监测工作。然而，欧盟立法严格规定了阉割和断尾程序，这使得在欧洲国家基本无法使用处理液作为监测工具。

为什么使用舌尖液？优势和劣势

在对所有的限制因素及可获得的信息进行考虑之后，我们头脑风暴，希望能开发出一种可以在欧盟法规下应用的群体监测技术。我们把重点放在死胎和断奶前死亡猪只上，因为我们认为在这两个群体中捕获病毒的可能性更高。

此外，对死亡动物进行采样还有其他好处，例如不需要进行采样培训，不需要干扰活仔猪，可供采样的动物数量很多（考虑到死胎和断奶前死亡率，大约有总产仔的15%可供采样），在最终的样本中，大多数窝都可以被代表，样本可以按照每天、每周、每批或每个房舍进行合样，最后，这种技术同样可以用于猪生产的其他阶段（例如保育）。

我们首先使用仔猪尾巴组织进行了测试。之所以选择尾巴，一是因为尾巴组织容易获得，其次是因为采集尾巴可以获得该窝的敏感性数据。然而，我们也发现此方式有几个局限性：1. 可供分析的液体很少甚至没有；2. 必须添加一些介质，以产生稀释效应；3.如果在采集过程中出现了粪便，那么样品就不是干净的样品，可能会影响检测结果。我们使用了均浆机对样本进行了均质处理，以增加最终的液体量。但结果依然不那么令人满意。

在结束了第一个尝试之后，舌尖被提议出来，认为可能是一个很好的候选组织。采集舌尖样本的理由是：舌头很容易取样（切掉舌尖），舌头处于一个湿润环境，并且在采集舌尖时，也会采集到一些口腔液（或在死胎的情况下，采集到少量羊水）。建议使用滤袋来收集舌尖液，并将组织冷冻储存。化冻之后获得的就是粉红色清洁液体，可以很容易转移到无菌容器中。此外，从舌尖液PCR获得的CT值，与用血清获得的CT值相似。由于上述种种原因，对ORF5序列的检测结果也与从血清样本中得到的相似。

这种样品类型的局限性与其他混合样方式没有什么不同。如果在非常多的样本中只收集到一个阳性的舌头，就会因为稀释效应造成敏感性的损失。然而，我们可以通过对更多的动物取样来克服个体敏感性的损失，从而提高样本的敏感性。但是，在净化蓝耳的情形时，对血清进行PCR检测是PRRS阴性的，而舌尖液仍然可能是阳性的。

最后，舌尖液通过在现场的测试，被证明在所有场景下都是一种有价值的PRRSV监测工具。这种新的技术为所有存在严格动物福利规定的情况下提供了新的可能性。

图：采集舌尖液(TTF)的步骤。1) 取出并 2) 切掉舌尖 (约 2cm), 3) 将其置于滤袋 4) 冷冻保存 5) 同一批次结束，或者一个监测时间段结束（样品混合在一起）6) 解冻样品，过滤袋使得液体集中在滤袋底部 7) 注射器吸取液体 8) 置于无菌管，提交实验室监测。